Umelé oplodnenie (in vitro fertilizácia) je technika, ktorá pomáha párom s poruchami plodnosti mať dieťa. Z vaječníkov ženy sa odoberú vajíčka a v laboratórnej miske sa oplodnia spermiami muža. Oplodnené vajíčko sa následne umiestni do ženského lona, kde rastie a vyvíja sa.
Ak má muž nízky počet spermií alebo žiadne spermie, napríklad kvôli dedičnému problému, alebo kvôli rakovine, je možné získať životaschopné spermie priamo z semenníka biopsiou. To sa potom použijú ako čerstvé alebo neskôr mrazené. Tento postup sa nazýva intracytoplazmatická injekcia spermií (ICSI) a zahŕňa vstrekovanie jedinej spermie do vajíčka, namiesto pridania spermie do vajíčka v laboratórnej miske. Čerstvé spermie sa môžu použiť len pri maximálne synchronizácii oboch partnerov, teda ak má byť výsledok úspešný. Ale zmrazené spermie zjednodušia celý tento proces.
Napríklad, z časového hľadiska možno odovzdať spermie v predstihu, a biopsia nemusí ani prebiehať v tej istej nemocnici ako oplodnenie vajíčka. Lekári dokonca tvrdia, že zmrazené semeno je omnoho výhodnejšie. Vedci analyzovali dáta zozbierané za pätnásť rokov a zistili, že mrazené spermie sa používajú rovnako často ako tie čerstvé, no je tam štatisticky významný rozdiel v oplodnení (mrazené spermie 62 %, čerstvé spermie 47 %).
Ako to ovplyvňuje prístup k inseminácii u psov a sučiek, ktoré sú monoestrálne zvieratá, sa v dnešnom texte dotkneme nielen človeka, ale aj veterinárnych postupov. Dosiahnutie úspešnej gravidity a primeraného počtu šteniat na vrh závisí od zdravotného stavu donorov a správneho načasovania párenia/inseminácie. Sučky dosahujú iba jeden až dva reprodukčné cykly za rok a ich cykly sa zaraďujú do riadeného systému, čo je dôležité aj pre veterinárov pri plánovaní inseminácie.
Príprava sučky na riadenú insemináciu
Kontrola zdravotného stavu suky je základom. Zahrňuje anamnézu predchádzajúcich háraní a pôrodov, celkový gynekologický profil, krvný obraz a biochemické ukazovatele (pečeňové a obličkové parametre) a vyšetrenie štítnej žľazy. Nedostatočná funkcia štítnej žľazy môže spôsobiť nepravidelnú ruju, neplodnosť alebo potraty. Nasleduje USG dutiny brucha so zameraním na reprodukčný aparát. Pri normálnych okolnostiach sú vaječníky a maternica u zdravej sučky takmer nezobraziteľné; lekár sleduje prípadné cysty, novotvary, náplň maternice a krčok maternice.
Ďalšie vyšetrenia zahŕňajú bakteriologické a genetické vyšetrenie vaginálneho výteru na prítomnosť baktérií spôsobujúcich pohlavne prenosné infekcie a na Mycoplasma/Ureaplasma/Chlamydia. Tieto patogény môžu viesť k embryonálnej mortalite a neplodnosti. Ak sú všetky vyšetrenia v poriadku, pokračuje sa k meraniam progesterónu a vaginálnej cytológii, ktoré pomáhajú určiť presný termín krytia alebo inseminácie.
Filozofia reprodukčnej ambulancie je použitie iba zdravotne nezávadného ejakulátu, ktorý je použitý pri riadenej inseminácii pre zabezpečenie zdravia oboch rodičov. Riadenejšia inseminácia pod endoskopickou kontrolou eliminuje bakteriálnu nálož ejakulátu a doplnením výživy a energie pre spermie sa zvyšuje úspešnosť inseminácie. Endoskopická intrauterinná inseminácia umožňuje vizuálne skontrolovať sliznicu vagíny a krčok maternice, čím sa vylúčia patologické stavy.
Ovariálny cyklus a načasovanie inseminácie
Prvé háranie nastáva vo veku 6-14 mesiacov, fyziologicky do veku dvoch rokov. Cyklus trvá 2-3 týždne a pozostáva zo štyroch fáz riadených pohlavnými hormónmi. Proestrus je prvá fáza, kde dominantné úlohy zohrávajú estrogény a FSH/LH, vajíčka dozrievajú a vznikajú žlté telieska. Nasleduje estrus, kde dochádza k zmenám správania suky a vyhľadávaniu psa na párenie; progesterón sa stáva dominantným faktorom. Dieestrus nastáva po úspešnej inseminácii a gravitačná fáza pokračuje s udržiavaním stabilného progesterónu. Anestrus predstavuje reprodukčný pokoj.
Pri načasovaní inseminácie sa sleduje koncentrácia progesterónu v sére spolu s vaginálnou cytológiou. Ideálna doba na párenie alebo insemináciu je približne 48-60 hodín po ovulácii, ak používame čerstvé alebo chladené spermie. Pri mrazených spermách je inseminácia odporúčaná neskôr, keď progesterón dosiahne 19-25 ng/ml. Kontrola kvality spermií u donora tesne pred insemináciou je kľúčová a zodpovedá sa čas podľa ich kvality. Vo všeobecnosti zdravé a čerstvé spermie s dobrou andrologickou kvalitou môžu prežiť až 40 hodín po ovulácii, zatiaľ čo mrazené spermie žijú len max. 1 deň alebo ešte menej a ich využitie je vhodné, keď vajíčka už čakajú v rohoch maternice.
Vaginálna cytológia pomáha quantifikovať bunkové zloženie pošvy. Ak koncentrácia progesterónu ukazuje insemináciu, cytológia musí potvrdiť vhodný stav. Napríklad ak cytológia ukazuje pomer jadrových buniek a bezjadrových buniek 50:50, čas ešte nie je. Ak zastúpenie bezjadrových buniek presiahne 90%, potvrdí sa vhodný čas na oplodnenie.
Možnosti oplodnenia suky
Pri ideálnom načasovaní je možné vybrať medzi prirodzeným párením a umelou insemináciou. Prirodzené párenie nesie riziká zranení zvierat a prenosu pohlavných chorôb, zatiaľ čo umelá inseminácia umožňuje dôkladne vyšetriť inseminačnú dávku a eliminovať riziká infertility samca. Inseminačné dávky sú dostupné ako čerstvé, chladené a mrazené. Čerstvé dávky majú najdlhšiu prežívateľnosť a kvalitu, nasledujú chladené a nakoniec mrazené. Okrem prirodzeného krytia existujú aj vaginálna inseminácia, TCI - transcervikálna inseminácia (IUI) a chirurgická inseminácia.
Naša reprodukčná ambulancia preferuje TCI/IUI insemináciu pod kamerovým endoskopom, kedy sa inseminačná dávka zavedie priamo do tela maternice cez krčok. Pri horšej kvalite inseminačnej dávky (napr. mrazená ID) sa odporúča chirurgická inseminácia cez malú incíziu brušnej steny, aby sa spermie dostali priamo do rohov maternice. Pri zdravých zvieratách je úspešnosť inseminácie čerstvými alebo chladenými dávkami nad 80 %. Pri reinseminácii sa šance na úspech ďalej zvyšujú.
Úspešnosť oplodnenia sa kontroluje na 25.-30. deň USG vyšetrením. Počas gravidity je možné určiť počet plodov RTG okolo 50. dňa, čo je bezpečné pre matku aj šteniatka. Spermobanky sú súčasťou reprodukčnej ambulancie a obsahujú rôzne plemená hlboko mrazených v tekutom dusíku pri -196°C. Jaroslav Pokorádi, Ph.D. - MVDr.
Ako funguje IVF | Príbeh plodnosti | BBC Earth Science
Tabuľka: Porovnanie čerstvých, chladených a mrazených spermií
| Typ spermií | Živosť u samice | Ochrana pred infekciami | Počet úspešných tehotenstiev |
|---|---|---|---|
| Čerstvé | 48-72 hodín | Často vyššia riziková bakteriálna nálož | Najvyššia v prípade synchronizácie |
| Chladené | 24-48 hodín | Možnosť doplnenia výživy | Vysoká, dobrá spoľahlivosť |
| Mrazené | Max. 1 deň po rozmrazení | Obmedzené riziká bakterií pri správnom spracovaní | Nižšia, vyžaduje vhodný čas ovulácie |
Podľa jednotlivých faktorov a plemena je načasovanie inseminácie individuálne. Realizujeme endoskopickú insemináciu, aby sme znížili riziká a maximalizovali úspešnosť.